一、常規清洗(日常維護)
1. 流動相選擇
- 高水相沖洗：優先使用含0.1%甲酸的水溶液，低比例有機相有助于溶解極性強的氨基酸殘留。
- 流速控制：以0.2-0.3mL/min低速沖洗，避免高壓損傷填料，逐步升至0.5-0.8mL/min。
2. 沖洗體積計算
- 按柱體積倍數沖洗。對于4.6×150mm色譜柱，需至少沖洗20倍柱體積。
二、深度清潔(針對性去除頑固污染物)
1. 有機溶劑梯度法
- 甲醇/水體系：依次用5%、20%、50%、100%甲醇梯度沖洗，每階段保持10-15分鐘。
- 乙腈/異丙醇組合：對脂溶性污染物，采用乙腈-異丙醇(1:1)混合液沖洗，可有效清除蛋白質碎片。
2. 酸堿交替處理
- 酸性清洗：0.1mol/L磷酸溶液，適用于溶解金屬離子螯合物。
- 堿性清洗：氨水，可分解生物大分子。
3. 特殊污染物處理
- 硫醇類物質：添加β-巰基乙醇，可還原二硫鍵。
三、維護與儲存規范
1. 保存溶劑選擇
- 短期存放可用80%甲醇，長期存儲推薦含0.1%疊氮化鈉的乙腈-水。
2. 再生程序
- 每月執行一次完整再生流程，提高流速至2.0mL/min并維持30分鐘。
3. 環境控制
- 儲存溫度保持在4-25℃，濕度低于60%，避免陽光直射。
四、驗證與問題排查
1. 性能驗證指標
- 基線波動<0.5mAU，理論塔板數恢復至初始值90%以上。
2. 異常情況處理
- 壓力驟升：立即停泵，反向低壓沖洗篩板。
- 保留時間漂移：重新校準流動相pH，檢查緩沖液新鮮度。
